隨著秋冬季的來臨，豬場腹瀉問題也變得逐漸嚴(yán)重。引起豬群腹瀉的原因有很多種，除了飼養(yǎng)管理（欄舍潮濕、溫度變化和斷奶轉(zhuǎn)群等）和飼料原因?qū)е碌姆莻魅静∫蛩赝?。還有寄生蟲、細(xì)菌性和病毒性傳染病因素導(dǎo)致的豬群腹瀉。其中，絕大部分腹瀉問題主要是由豬性腹瀉相關(guān)病毒感染引起，這個(gè)結(jié)論也可從各實(shí)驗(yàn)室的腹瀉樣本檢測數(shù)據(jù)得到佐證。特別是2010 年以來由 PEDV變異株所致的仔豬腹瀉及2014年發(fā)現(xiàn)的致病性PDCoV，使我國養(yǎng)豬業(yè)面臨新的威脅和挑戰(zhàn)，如何利用實(shí)驗(yàn)室檢測輔助手段防控秋冬季病毒性腹瀉是當(dāng)前關(guān)注的熱點(diǎn)。

一、什么是豬病毒性腹瀉？

二、國內(nèi)豬病毒性腹瀉流行情況

由于非瘟疫情壓力，養(yǎng)殖企業(yè)對于生物安全非常重視，認(rèn)為各種洗消措施執(zhí)行的非常到位，但是有些舉措可以很好的防控非瘟，不一定能防控得住病毒性腹瀉，與ASFV主要以接觸傳播不同，PEDV傳播速度更快，腹瀉豬只排毒量大，且PEDV可以通過氣溶膠的方式遠(yuǎn)距離傳播，這也提示我們要關(guān)注不同病原的生物學(xué)特性。通過對國內(nèi)不同省市公布的流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)來看，豬病毒性腹瀉有一定的季節(jié)性，多以冬春季節(jié)多發(fā)，夏季也時(shí)有出現(xiàn)。以PEDV感染為主，呈普遍流行，2010年10月以后，國內(nèi)發(fā)生了一系列大規(guī)模的PEDV疫情，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。這些暴發(fā)是由新出現(xiàn)的傳播力極強(qiáng)的非SINDEL毒株引起的，新生仔豬的死亡率達(dá)到50-100%。隨后也發(fā)現(xiàn)了新的SINDEL毒株，證明經(jīng)典毒株和原來疫苗保護(hù)不了的變異株在國內(nèi)共同流行。

很多豬企對豬病毒性腹瀉的認(rèn)知依然停留在PEDV上，對于其他腹瀉病毒缺少關(guān)注，但是近幾年的監(jiān)測數(shù)據(jù)表明，其他病毒單獨(dú)或者混合感染引起性腹瀉病例也逐漸增加。PDCoV雖然出現(xiàn)時(shí)間較晚，但研究表明該病毒具有比PEDV更廣泛的組織嗜性，以及細(xì)胞的感染譜，有更大的人畜共患的潛在風(fēng)險(xiǎn)，危害不容小覷，且該病還能和PEDV共同出現(xiàn)加重臨床癥狀，也應(yīng)作為重點(diǎn)監(jiān)測防控疫病；PoRV在部分地區(qū)流行，近年來感染率也在逐漸增加；TGEV致病性低于PEDV主要呈現(xiàn)散發(fā)流行態(tài)勢，但因臨床癥狀與PEDV有相似，易造成診斷的混淆，影響豬場防控策略的制定和執(zhí)行。

目前豬群感染狀況不僅僅是單一病毒感染，很多豬群出現(xiàn)了二重甚至三重感染的情況，主要以與PEDV混合感染的方式出現(xiàn)，以PEDV/PoRV、PEDV/PDCoV、PEDV/TGEV和PEDV/PoRV/TGEV這幾種混感組合較多，當(dāng)出現(xiàn)混合感染時(shí)，對豬群的致死性更強(qiáng)，也更難處理。由于RNA冠狀病毒的變異能力較強(qiáng)，病毒的基因組也在不斷發(fā)生著變異，如TGEV發(fā)生突變，形成一種能夠感染呼吸道的新毒株P(guān)RCV。在歐洲出現(xiàn)了PEDV/TGEV致病性重組的變種毒株（豬腸道冠狀病毒，SeCoV），目前僅在德國意大利和斯洛文尼亞有報(bào)道，但其致病性、臨床危害以及交叉保護(hù)等更多細(xì)節(jié)信息尚不清楚。以上出現(xiàn)的種種變化，對病原的診斷和防治要求也越來越高，也給豬場生產(chǎn)帶來了巨大的壓力。

三、明日達(dá)科技豬病毒性腹瀉檢測方案及產(chǎn)品優(yōu)勢

明日達(dá)病毒性腹瀉防控方案

相對于病毒分離法、熒光抗體檢測、免疫組織化學(xué)法、常規(guī)RT-PCR檢測和膠體金檢測，多重RT-PCR方法有著顯著優(yōu)勢：① 敏感性非常高，可以做到半定量；② 能確診單一感染或混合感染, 達(dá)到診斷和鑒別的雙重目的;③ 比傳統(tǒng)檢測方法更快速、方便，更能貼近一線生產(chǎn)。

根據(jù)不同地區(qū)豬病毒性腹瀉流行狀況及客戶自身設(shè)備限制因素，我們?yōu)椴煌枨罂蛻籼峁┎煌目茖W(xué)精準(zhǔn)的檢測服務(wù)方案：

• 方案一、PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR檢測試劑盒+ PDCoV單重RT-PCR試劑盒

• 方案二、PEDV/TGEV/PDCoV三重RT-PCR檢測試劑盒+PoRV單重RT-PCR試劑盒

• 方案三、PEDV+TGEV+PDCoV+PoRV單重RT-PCR試劑盒

• 方案四、可為大型客戶提供定制豬病毒性腹瀉RT-PCR試劑盒產(chǎn)品

產(chǎn)品優(yōu)勢

①  操作簡單、多項(xiàng)目同步進(jìn)行

提供2種方案：

如果實(shí)驗(yàn)室擁有4通道及以上PCR儀器，可以直接選擇腹瀉類多重PCR產(chǎn)品進(jìn)行檢測

● 多重PCR產(chǎn)品：單孔可做多個(gè)病毒性腹瀉病原檢測項(xiàng)目

以PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR檢測試劑盒為例，擴(kuò)增曲線如下圖（2）所示：

圖2、PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR擴(kuò)增曲線

如果實(shí)驗(yàn)室擁有4通道以下PCR儀器，可以選擇空間單重產(chǎn)品

● 多重PCR產(chǎn)品（空間單重）：由空間單重PCR產(chǎn)品形成多重優(yōu)勢。明日達(dá)產(chǎn)品多個(gè)檢測項(xiàng)目，運(yùn)行程序全部一致。一臺(tái)儀器一個(gè)程序一次運(yùn)行即可檢測多個(gè)疾?。?/span>

酶與PCR反應(yīng)液為兩管設(shè)計(jì)（當(dāng)前產(chǎn)品），減少因操作導(dǎo)致的誤差

即將推出一管式高度預(yù)混液，只需分裝加樣即可上機(jī)檢測，讓操作更簡便，敬請期待！

擁有高活性反轉(zhuǎn)錄體系，10min即可完成反轉(zhuǎn)錄步驟，搭配明日達(dá)自主研發(fā)15min磁珠自動(dòng)化提取，從提取到檢測全流程僅需90min。

②  特異性強(qiáng)

明日達(dá)腹瀉類試劑盒能夠特異性擴(kuò)增PEDV、TGEV、PoRV以及PDCoV靶標(biāo)，相互之間無交叉反應(yīng)；同時(shí)對CSFV、PPRSV、PCV2等十幾種其他豬病無交叉反應(yīng)。

以PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR檢測試劑盒為例：

⑴ 用設(shè)定的多重RT-PCR反應(yīng)條件對PEDV、TGEV和PoRV標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行單獨(dú)或者兩兩混合檢測：

⑵ 用設(shè)定的多重RT-PCR反應(yīng)條件對PEDV、TGEV、PoRV、PCV2、CSFV和PRRSV標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測，結(jié)果如下圖（9）所示：

圖9、加入PEDV、TGEV、PoRV、PCV2、CSFV和PRRSV

③  敏感性和重復(fù)性好

將內(nèi)部核酸質(zhì)控品稀釋到 100copies/μL， 10copies/μL， 1copies/μL，0.1copies/μL，共計(jì) 4 個(gè)梯度， 每個(gè)梯度做 24 個(gè)平行檢測， 計(jì)算每個(gè)梯度的檢出率，平均 Ct 值和變異系數(shù)（CV%）。

以PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR檢測試劑盒為例（表1）：

表1 敏感性和重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

從結(jié)果可知，PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR最低檢測限為1copies/μL， 所有梯度的檢測CV%均在2%以下，說明該產(chǎn)品具有良好的敏感性，特異性和穩(wěn)定性。

結(jié) 語

隨著腹瀉病毒自身不斷變異重組，致病因素也逐漸增多，豬場獸醫(yī)工作者對豬只的混合感染的認(rèn)識(shí)不夠，沒有很好的鑒別手段，就有可能給腹瀉病的診治帶來誤導(dǎo)，錯(cuò)過了診治的黃金期，給豬場帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。由于近幾年全行業(yè)養(yǎng)殖水平的提高，中大型甚至是小型豬企都樹立了疫病防控的先進(jìn)理念，也有的建立了能為自己豬場服務(wù)的高水平實(shí)驗(yàn)室檢測體系，從而針對復(fù)雜的問題，能夠迅速剝繭抽絲，找出主要問題所在，從而將損失最小化。明日達(dá)科技提供的豬病毒性腹瀉多種RT-PCR解決方案操作上更便捷、方法精準(zhǔn)科學(xué)、產(chǎn)品敏感性特異性好，可為更多豬場解決診斷難題。